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測定例

DEP-Chip測定例ではDEP-Chipを使った、電気化学的DNA検出法(凝集法)と、それによるDNA濃度測定・DNA検出の他、グルコース濃度測定をご紹介しています。

  1. 電気化学的DNA検出法(凝集法)の原理と特長
  2. 電気化学的DNA検出法(凝集法)による濃度測定
  3. 電気化学的DNA検出法(凝集法)によるDNA遺伝子検出
  4. DEP-Chipを用いたグルコース濃度の測定

1.電気化学的DNA検出法(凝集法)の原理と特長

電気化学的DNA検出法(凝集法)の原理と特長図

電気化学的DNA検出法(凝集法)は特許です。(特許登録3511596)

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2.電気化学的DNA検出法(凝集法)によるDNA濃度測定

DNA濃度測定1

測定条件
LSV:掃引速度 100mV/sec、掃引範囲 0-1V
DNA:サケ精子由来

DNA濃度測定1図

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DNA濃度測定2 [PCR増幅産物濃度測定値の比較]

初期コピー数、PCRのサイクル数の条件を変えてPCRを行い、得られたPCR産物の濃度を2種類の方法(吸光度法、電気化学的法)で測定し比較。

DNA濃度測定2 [PCR増幅産物濃度測定値の比較]図

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3.電気化学的DNA検出法(凝集法)によるDNA遺伝子検出

サルモネラ菌遺伝子検出

■従来法
 invA遺伝子検出例(PCR)

サルモネラ菌遺伝子検出 写真

Total 50μlのPCR反応後、
2μlの反応液を解析。
M:50-2000 bp Ladder

■凝集法
 検出結果例

サルモネラ菌遺伝子検出 グラフ

■従来法
 検出試薬キット例(LAMP)

サルモネラ菌遺伝子検出 写真

Total 25μlのLAMP反応後、
1μlの反応液を解析。
M:50-2000 bp Ladder

■凝集法
 検出結果例

サルモネラ菌遺伝子検出 グラフ

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腸管出血性大腸菌遺伝子検出

■従来法
 腸管出血性大腸菌
 検出試薬キット(LAMP)

腸管出血性大腸菌遺伝子検出 写真

Total 25μlのLAMP反応後、
1μlの反応液を解析。
M:50-2000 bp Ladde

LAMP Condition
65℃,60min.

■凝集法
 検出結果例
 

腸管出血性大腸菌遺伝子検出 グラフ

Template
a:Positive Control DNA
b:Negative Control
c:陽性検体1(大腸菌O157ゲノム102copy)
d:陽性検体2(大腸菌O157ゲノム103copy)
e:陰性検体2(大腸菌O18ゲノム102copy)

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GMトウモロコシ遺伝子検出

■従来法
 GMトウモロコシ検出試薬
(LAMP)

GMトウモロコシ遺伝子検出 写真

Total 25μlのLAMP反応後、
1μlの反応液を解析。
M:50-2000 bp Ladder

LAMP Condition
65℃,60min.

■凝集法
 検出結果例
 

GMトウモロコシ遺伝子検出 グラフ

Template
a:陽性コントロールプラスミド
b:トウモロコシゲノム (遺伝子組み換え体ではない)
c:D.W.

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血液からのHBV遺伝子検出

■従来法
 (Nested PCR)

血液からのHBV遺伝子検出 写真

Total 50μlのPCR反応後、
2μlの反応液を解析。
M:50-2000 bp Ladder

Template
a:HBV患者血液1(HBV-DNA(+))
b:HBV患者血液2(HBV-DNA(++))
c:健常者血液  (HBV-DNA(-)

■凝集法
 検出結果例

血液からのHBV遺伝子検出 グラフ

■従来法
 (LAMP)

血液からのHBV遺伝子検出 写真

Total 25μlのLAMP反応後、
1μlの反応液を解析。
M:50-2000 bp Ladder

Template
a:HBV患者血液1(HBV-DNA(+))
b:HBV患者血液2(HBV-DNA(++))
c:健常者血液  (HBV-DNA(-))

■凝集法
 検出結果例

血液からのHBV遺伝子検出 グラフ

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4.DEP-Chipを用いたグルコース濃度の測定

酸素非固定

グルコースオキシターゼを使用し、クロノアンペロメトリーで測定した。

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酸素固定

グルコースオキシターゼを電極表面上にドライアップにより固定化し、クロノアンペロメトリーで測定した。
非固定の場合と比較して、電流値が高く、測定レンジが広い。
DEP-Chipを用いたグルコース濃度の測定図

詳細についてはお問い合せください(メーラーが起動します)

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